本发明提供了一种莱苞迪甙A的制备方法，包括：在二磷酸尿苷葡萄糖和葡萄糖基转移酶存在下，以甜菊糖原料为底物配制反应液，调节所述反应液的pH为6.0‑8.0，在恒定温度20‑45℃下进行搅拌反应后，收集得到莱苞迪甙A；所述甜菊糖原料包括甜菊苷，所述葡萄糖基转移酶的氨基酸序列包括如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。该制备方法是一个高效简便，成本低，转化率高，绿色环保的生物酶法，可以广泛适用于工业化规模生产。本发明还提供了莱苞迪甙A制备用酶及应用。