本发明涉及一种以果葡糖浆作为碳源发酵生产普鲁兰多糖的方法，包括以下步骤：将保存在4℃的斜面菌种于生化培养箱中活化后接于种子培养基中培养，制得产普鲁兰多糖的种子液；将种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养；发酵结束后，将发酵液离心去除菌体和其他沉淀物，加入2倍体积预冷的无水乙醇，充分搅拌，4℃静置24小时使普鲁兰多糖充分沉淀，过滤后用无水乙醇再次冲洗，烘干即得到普鲁兰多糖粗产品。本发明利用F55型的果葡糖浆对原有配方中的蔗糖进行了替换，大大降低了生产成本，这对工业生产普鲁兰多糖具有重要的意义。