本发明公开了一种脐带间充质干细胞的制备和提取方法，包括以下步骤，清洗；酶解，取出脐带粉碎处理，使用浓度为0.1%的胶原酶Ⅱ处理，酶解时间为6～8小时；过滤，向脐带酶解液中带入5倍体积的蒸馏水，使用筛网进行初步过滤，然后倒入差速分离机中进一步过滤；原代培养；传代培养；活性检测；冷冻保存，将优选后的细胞簇分组保存在保温罐中，保温罐的温度应为4℃，本发明涉及生物工程技术领域。该脐带间充质干细胞的制备和提取方法，能够有效去除存在基因缺陷的细胞，降低对干细胞接受者的损害，同时使干细胞加热和冷藏过程中温度变化更加平和，避免细胞提取过程中的温度改变容易使细胞失活，降低细胞的提取率的问题。