本发明公开了一种重组小RNA的生产方法，该方法以tRNA为支架，嵌合miRNA前体，在大肠杆菌中表达目标小RNA。另外，本发明还公开了采用该方法生产的重组小RNA的应用。本发明设计制备的重组小RNA为通过生物工程技术获得，具有设备简便、生产快速、产量高、成本低、功能性好等优势；经多种技术手段检测表明，本发明的方法能方便快捷地制备多种miRNA/siRNA/RNA适配体，生产制备的重组小RNA满足科学研究及药物研发的需求。