本发明公开了一种镍掺杂的有序介孔氧化铝及固定化果糖基转移酶的制备方法，属于生物工程技术领域。所述固定化果糖基转移酶制备方法包括：（1）镍掺杂的有序介孔氧化铝载体的合成；（2）通过铝与氨基酸的配位，将果糖基转移酶固定于载体上；（3）通过镍的激活，提高固定化酶的酶活性。该方法由于制备条件温和，酶与载体间的作用力为配位键，作用力强，酶不容易脱落，同时，由于镍的激活作用，酶能够保持较高的活性，介孔结构的载体，有利于底物快速到达反应位点，实现了果糖基转移酶高活性和牢固的固定化之间的平衡。