本发明提出了一种口蹄疫病毒样颗粒抗原，所述口蹄疫病毒样颗粒抗原由O型口蹄疫病毒VP4、VP2、VP3、VP1抗原蛋白组装而成。本发明还提供了包括免疫量的所述口蹄疫病毒样颗粒抗原的口蹄疫病毒样颗粒疫苗组合物及其制备方法和应用。经免疫原性和免疫原性对比试验证明，该口蹄疫病毒样颗粒疫苗组合物具有很好的保护力，能同时防控多种拓扑型O型口蹄疫感染。