本发明涉及一种负载微肽纳米脂质体及其制备、应用以及使用方法，属于化妆品技术领域。本发明利用卵磷脂和胆固醇制备纳米脂质体；利用微肽、透明质酸钠、绞股蓝提取物制得包裹微肽的脂质体；将包裹微肽的脂质体经匀浆机剪切，制得纳米脂质体溶液；将可溶性蛋白多糖、葡萄糖、透明质酸钠、甘露糖、烟酰胺以及葡糖荃酸加入纳米脂质体溶液中，冷冻干燥后制得负载微肽纳米脂质体。本发明包裹方式独特，充分利用微肽、透明质酸钠和绞股蓝提取物的综合性能，令抗衰老效果最大化，同时，利用脂质体的包裹特性使微肽保持良好活性，便于保存、携带。