本发明公开了一种真菌预处理木质纤维素及直接微生物转化发酵产氢的方法，属于发酵工程领域，技术方案为：一、可食用真菌接种于待预处理木质纤维素中进行预处理；二、干燥；三、配置产氢菌的营养盐溶液，加入干燥后的木质纤维素，组成培养基，通入氮气，接种产氢菌的种子液，发酵产氢。本发明使用完全的生物方法完成由木质纤维素到氢气的直接转化过程，减少了木质纤维素产氢过程中的能源消耗，设备投入，同时在生物发酵产氢的过程中，无需向培养基中投加酵母粉及维生素液，极大的降低了木质纤维素发酵制氢成本。本发明采用生物预处理木质纤维素取得较好的效果，木质素相对去除率达到70.2％，产氢量达到94.5ml/g‑预处理木质纤维素。