本发明提供了一种用于哺乳动物宿主细胞表达蛋白/多肽的表达载体，包含标记基因和用于插入目的基因的限制性内切酶酶切位点，目的基因后的Poly(A)加尾信号数量为2个或2个以上，标记基因的启动元件仅为TATA框。本发明提供的表达载体的选择标记基因的上游含有两个或以上的Poly(A)加尾信号，使上游强启动子对下游TATA框活性的干扰最小化，以驱动选择标记基因表达。本发明的表达载体可在短时间内产生用于重组蛋白质表达的稳定且高产的细胞系，并且基因扩增不需要药物选择/介导，可以在没有任何药物诱导扩增的条件下直接选择，这些细胞系可长期稳定表达高水平的重组蛋白，非常适用于工业化生产蛋白或多肽。