本发明公开了一种FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶的生产、纯化方法，属于生物工程领域。本发明以大肠杆菌为宿主，表达来源于洋葱伯克霍尔德菌的葡萄糖脱氢酶，过分批补料，分阶段温度控制，进行葡萄糖脱氢酶表达。本发明酶葡萄糖脱氢酶活达到22200.0U/L，菌体量达69.8g/L；通过三步层析对粗酶液分离纯化，获得比酶活109U/mg的重组酶，酶的性质问题，适宜于工业化生产。