本发明公开了一种克隆酶供体免疫检测试剂，包括：底物和缓冲液，所述缓冲液的pH为2.0～8.5，所述底物能被克隆酶水解，所述克隆酶为β‑D‑半乳糖苷酶，所述底物为式(I)所示的β‑D‑半乳糖苷化合物。本发明还公开了克隆酶供体免疫检测试剂的制备方法、检测系统、检测方法以及试剂盒。本发明提供的克隆酶供体免疫检测试剂具有较高的灵敏度和较大的工作区间，底物性质稳定，能稳定存在于克隆酶供体免疫检测试剂中，可以直接以液体试剂的形式储存、销售，免去了制备冻干试剂的工艺步骤，也无需临时配置，大大降低了生产成本低，提高了使用的便利性。