本发明公开了一种胶乳增强免疫比浊检测试剂盒及其制备和检测方法。本发明试剂盒包括试剂R1和试剂R2；试剂R1包括电解质、缓冲液、促进剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、与含有马来酰亚胺基团的有机小分子α共价偶联的生物大分子或合成高分子，试剂R2包括电解质、缓冲液、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、与含有游离氨基的有机小分子α抗体偶联的胶乳微球。本发明通过将有机小分子α与生物大分子或合成高分子结合，利用样本中有机小分子与结合在生物大分子或合成高分子上的抗原竞争结合试剂R2中的微球表面的抗体，形成网状结合物，使反应体系浊度下降，从而可通过测量透过悬浊液的吸光度变化测定被检测标志物的浓度，使有机小分子的检测更为方便。