本发明公开了一种核酸诊断冻干试剂，包括含有2%‑10%海藻糖，2%‑5%葡聚糖，0.5%‑2%PEG8000，0.01mg‑0.02mg/ml BSA蛋白的冻干保护剂，所述冻干保护剂中含有肺炎支原体、肺炎衣原体和腺病毒三套引物和探针。本发明的优点在于冻干试剂中同时含有肺炎支原体，肺炎衣原体，腺病毒三种病原体核酸，能实现对多种病原体核酸的扩增检测，即采用一个反应体系可同时检测三个靶标，大大节约了试剂和检测耗材，检测通量高，扩大了临床应用范围。本发明的冻干试剂在冻干处理时，首先采用液氮对液态试剂进行快速预冻，缩短了后续冻干过程，提高了冻干试剂的稳定性。