本发明涉及生物工程技术领域，公开了一种富含游离氨基酸的酵母蛋白粉及其制备方法。本发明的酵母蛋白粉其游离氨基酸含量高达380 g/kg（干粉）以上，其5 wt％水溶液的澄清度低于0.550。本发明制备方法利用新鲜的培养酵母湿菌泥作为起始原料，生产工艺包括有：酵母蛋白的溶出、酶解、脱色、生物发酵、熟成、减圧浓缩、喷雾干燥等。本发明的方法不仅能达到最大限度地溶出酵母菌体中的蛋白含量，提高游离氨基酸含量，还能有效地去除酵母抽提液所持有的那种特殊异臭味，且产品水溶液的色泽清亮透明，使产品可以广泛地应用到各种饮食品和保健食品中，具有很好的汎用性。