本发明涉及生物工程技术领域，具体是一种提高大麦小孢子培养愈伤产量和绿苗的方法，包括以下步骤：种植大麦，待幼苗生长至二叶一心期时，对其进行低温处理，即将其移至3‑5℃培养28‑32天后移植于人工气候室。本发明优点在于：本发明针对大麦小孢子技术中的苗期管理做出改良，通过低温处理大麦幼苗一段时间，将大麦幼苗移至人工气候室种植，显著提高大麦小孢子愈伤产量和成绿苗数，使大麦小孢子培养技术操作更加高效。这项改良技术可应用于大麦单倍体育种、单倍体转化。