本发明提供的一种发酵培养基及高效表达蛋白的发酵方法，涉及酶制剂技术领域。一种发酵培养基，按重量百分比计，包括：碳源3～6％，无机盐2.5～4.5％，PTM10.4～1.2％，余量的水。该培养基减少发酵不稳定因素，降低成本，高效发酵。一种高效表达蛋白的发酵方法，包括：将菌体接种至装有第一培养基的摇瓶中进行培养，使菌液的光密度值不小于10。将菌液接种至含有上述发酵培养基的第一培养罐中进行发酵。该方法操作简便，可控性强，适合大规模生产。