本发明公开了一种杂交瘤细胞生产单克隆抗体的方法，将杂交瘤细胞至于生物反应器中连续二级放大自动化培养，包括对杂交瘤细胞进行一级细胞放大和二级细胞放大。在搅拌通气的条件下大规模自动化培养杂交瘤细胞，具有明显的在线放大细胞优势和连续培养的优势，是大规模自动化细胞培养的最佳途径，工艺合理、蛋白产量和活性高。