本发明属生物工程抗体技术领域，具体涉及一种抗CD24抗体药物偶联物的制备方法及用途。本发明利用化学偶联技术将一种全新一氧化氮供体二乙胺偶氮鎓二醇盐分子通过马来酰亚胺‑双硫键偶联到抗CD24单克隆抗体G7mAb重链恒定区，制备得到抗体药物偶联物HN‑01，利用抗体的特异性靶向作用，将一氧化氮供体分子富集到肿瘤细胞表面并内化至细胞内定向释放一氧化氮，提高瘤内治疗指数的同时降低对正常组织的毒副作用。体内和体外实验结果证明，抗体药物偶联物HN‑01充分利用了抗体的靶向性和一氧化氮抗肿瘤的特异性，解决了一氧化氮供体的肿瘤靶向递释问题，具有良好的临床应用价值。