本发明涉及一种具有缓解疲劳和抗氧化功能的牦牛骨蛋白肽的制备方法及制备得到的蛋白肽，其主要改进点为，对牦牛骨蛋白液进行高频超声波和超高压微射流等预处理，在不添加任何酸和碱的条件下，利用多种复合蛋白酶进行分步酶解，通过膜分离、凝胶分离及反相HPLC分离技术分离得到。本发明的牦牛骨蛋白肽制备方法简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。