本发明涉及一种联合检测CA19‑9与CEA的时间分辨荧光免疫层析试纸条，所述试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维棉和吸水纸，在所述硝酸纤维素膜上包被有CA19‑9单克隆抗体作为检测1线（T1线）、CEA单克隆抗体作为检测2线（T2线）、以及羊抗鼠多克隆抗体作为质控线（C线），在所述玻璃纤维棉上分为点样区和结合区，在所述结合区上喷涂有时间分辨荧光微球标记的CA19‑9单克隆抗体复合物、CEA单克隆抗体复合物。本发明针对CA19‑9与CEA联合检测的时间分辨荧光免疫层析试纸条及试剂盒，能够实现在较短时间内完成对CA19‑9与CEA的浓度检测，检测结果准确度高、灵敏性好，能够满足临床床旁快速检测和基层社区医院的需要。