本发明属于生物工程领域，更具体地，涉及一种血清8型的重组腺相关病毒的制备方法。包括如下步骤：(1)在片状载体中使用无血清培养基培养293T细胞；(2)将腺相关病毒载体系统质粒瞬时转染培养的293T细胞，得到转染后的细胞；所述腺相关病毒载体系统质粒包括AAV表达载体质粒，辅助质粒pHelper和AAV衣壳质粒pRC8；(3)继续培养步骤(2)所述转染后的细胞，并按时收集和更换所述无血清培养基，得到含有重组腺相关病毒的培养基。本发明的腺相关病毒制备方法既能够保证生产稳定性，又节省了制备和纯化的步骤并显著降低了下游病毒纯化的难度，为一种特别适合工业化规模生产的血清8型腺相关病毒的制备方法。