本发明提供了一种检测肺炎链球菌荚膜多糖结合物中游离多糖含量的测定方法，所述方案包括以下步骤：分别向肺炎链球菌荚膜多糖和肺炎链球菌荚膜多糖对应的结合物加入脱氧胆酸钠溶液，并调节pH至2‑6，离心收集上清液；向肺炎链球菌荚膜多糖上清液中加入显色试剂，进行显色反应；向肺炎链球菌荚膜多糖对应的结合物上清液中加入显色试剂，进行显色反应；测定吸光度，计算游离多糖含量。本发明开发了一种分析成本低、操作简单的定量检测肺炎多糖结合物中游离多糖方法。