本发明公开了一种产ESBLs细菌检测试剂，其中包括胰酪胨、酵母浸粉、牛肉浸粉、NaCl、3‑吗啉丙磺酸、丙酮酸钠、硝酸钾、海藻糖、酚红、亚甲基蓝、制霉菌素、牛胆盐、万古霉素等成分。为方便检测，本发明将该检测试剂应用于检测产ESBLs细菌试剂盒中。本发明通过科学配制的检测试剂，可对样本中的产ESBLs细菌进行直接检测，且试剂成本低；通过在检测板上包被特殊底物、生长因子、抑制剂，使产ESBLs细菌特异性生长，从而对产ESBLs细菌进行及时检测，给临床提供了科学有效的指导，对预防控制院内感染的流行具有重要价值，而检测结果只需要目测，无需借助其他专用设备，满足了不同客户群的需求；同时由于其检测周期短，24小时内即能出结果，有利于患者的早期诊断和治疗。