本发明公开了一种薄层色谱联合高效液相色谱检测动物饲料中甲砜霉素含量的方法，属于食品安全风险监测领域。本发明方法包括如下步骤：动物饲料经乙酸乙酯提取，乙睛饱和正己烷脱脂，以体积比二氯甲烷:丙酮:氨水（25%‑28%）等于（3‑5）:（5‑7）:（0.05‑0.25）的混合液作为展开液采用薄层色谱分离样品，再采用高效液相色谱进行检测。本发明显著提高了对动物饲料中其他物质的抗干扰能力，同时降低了检测成本，减少了有机溶剂的用量，定量分析结果可靠，适用于基层检测单位对饲料中的甲砜霉素进行日常监控。