本发明公开了一种α‑半乳糖苷酶及其制备方法和应用，属于生物工程技术领域。α‑半乳糖苷酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，另外还提供了基因组中含有该序列的表达载体、基因工程菌。该酶的制备方法是将载体pMAL‑c2X中的麦芽糖全基因替换为麦芽糖基因前端300bp，插入N端加6xHis标签的编码基因，获得重组质粒转入大肠杆菌野生菌株R‑7‑122，获得重组菌株R‑92066，经过IPTG诱导表达，收集表达产物、分离纯化，得到目的蛋白。本发明的α‑半乳糖苷酶有效弥补了常规α‑半乳糖苷酶不能耐受蛋白酶消化的不足，为饲料中α‑半乳糖苷类物质的生物处理技术提供了一种新的微生物资源。