本发明涉及一种牛呼吸道合胞体G蛋白特异性核酸适配体、其应用及其筛选方法，属于生物工程领域。本发明通过微孔板法不同轮次筛选获得多条G蛋白的核酸适配体候选物，选择测序结果出现频次较高的适配体，用I‑ELAA法测定了其与G蛋白的结合力，五条适配体G‑6、G‑13、G‑39、G‑55和G‑72的KD值分别为34.17±2.1nM、28.33±2.07nM、48.09±1.05nM、32.06±2.27nM和25.27±1.34nM，二级结构预测显示核酸适配体均具有稳定的颈环状或发卡状结构，说明本次筛选的五条适配体均能与G蛋白特异、稳定的结合，可用于后续检测牛呼吸道合胞体抗原或抗体的酶联适配体法的建立。