本发明公开了一种产己二酸的大肠杆菌重组菌及其应用，属于生物工程领域。本发明是以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，分模块过量表达β‑酮硫解酶基因、3‑羟酰基‑辅酶A脱氢酶基因、3‑羟基己二酰脱氢酶基因、5‑羧基‑2‑戊烯酰辅酶A还原酶基因、己二酰辅酶A，并替换启动子；己二酸的摇瓶产量可达到2.23g/L，产率达51.6％。此重组菌的启动子进行替换，不需额外添加诱导剂，节约成本。