本发明公开了一种抗禽类传染性支气管炎病毒的纳米抗体，制备时首先将IBV病毒在鸡胚上传代培养，将含有病毒的鸡胚尿囊液收集并进行纯化；从未经免疫的健康骆驼的外周血淋巴细胞中提取其RNA，特异性扩增骆驼重链抗体可变区基因，将酶切后基因与噬菌粒载体pCANTAB5E连接后电转化至大肠杆菌TG1，获得VHH抗体基因库；分析其库容量及多样性后，筛选出能够与IBV特异性结合的纳米抗体VHH‑A2片段；构建pet28a‑A2表达载体，对其进行原核表达、纯化与鉴定，即得到所需要的纳米抗体。本发明制备的纳米抗体作为一种新型的基因工程抗体，由于其独特的结构特征，抗原识别能力强，可用于快速、准确的检测禽类（如鸡）传染性支气管炎，且制备周期短，方法简单。