本发明涉及核苷酸序列、一种使用其提高蛋白表达效率的表达载体及用其制备蛋白的方法及应用。用该表达载体无论表达单个蛋白还是多个蛋白，与常规表达载体相比，所表达的可溶性蛋白含量占整个菌体总蛋白量均较高；内毒素含量均较低，仅需清除1次即可达到配苗要求，操作简单。用该表达载体表达后的蛋白制备疫苗均可使靶标动物获得完全保护。