本发明提供用于检测登革热、基孔肯雅及寨卡病毒的三重实时荧光定量PCR引物和探针及试剂盒。所述试剂盒中包含基于实时荧光定量PCR技术检测登革热、基孔肯雅及寨卡病毒的引物及探针，它们的序列分别如SEQIDNO:1‑9所示。本发明采用三重实时荧光定量PCR技术建立快速检测登革热、基孔肯雅及寨卡病毒的方法，该方法与单重实时荧光定量PCR相比，灵敏度上无明显差异，20次独立重复实验结果显示本方法具有良好的稳定性。本方法简化了实验步骤，减少样本用量，节约实验成本，为快速排查疑似感染人群提供参考信息，为相关疾病的鉴别诊断提供技术支持，为控制疫情争取宝贵时间。