本申请公开了一种中阶梯光谱仪的光谱定标方法、装置、设备及计算机可读存储介质。其中，方法包括利用图像处理算法计算当前帧汞灯在不同波长处光斑位置的坐标偏差值；若坐标偏差值不在偏差允许范围内，则生成探测器装调位置旋转角度不符合要求的指令。其中，偏差允许范围基于坐标偏差标准曲线和阈值确定；坐标偏差标准曲线为拟合不同波长光斑位置的坐标偏差值与相应的位置偏差量得到；位置偏差量为特征光谱设计模型的理论位置和探测器光斑的实际位置在最佳匹配位置处的偏差量。本申请解决了相关技术中由于光斑位置相对光学系统发生旋转导致光谱定标精度降低的问题，保证中阶梯光谱仪探测器安装调试精度，有效提高了中阶梯光谱仪的光谱定标精度。