本发明涉及一种骨骼肌肌管力学测定芯片及制备方法，可以用于测定骨骼肌肌管收缩时的力学强度，可在生物医学工程领域的科研中应用。本骨骼肌肌管力学测定芯片由玻璃爬片，双层聚合物材料基底和荧光标记物组成。玻璃爬片作为整个芯片的基底，起到支撑与稳固作用；聚合物材料基底在玻璃爬片上层，分为两层，下层较厚，通过匀胶机的不同转速控制在38μm以上，上层控制在10μm以内；荧光标记物作为本项发明的核心要素，夹在两层聚合物材料之间，靠近上表面，达到被表面骨骼肌肌管收缩力影响而产生位移的目的。本发明具有易于观测的特点，可大大提高肌管收缩力测定的准确性和直观性，操作难度大大降低，可在较短周期内完成肌管培养以及力学测定等实验步骤。