基于灰度梯度值的自适应自动聚焦方法，本发明涉显微镜的自动聚焦问题，提出一种基于灰度梯度值的自适应自动聚焦方法。该方法首先以离焦的空白图像作为参考对象与当前图像相比较得到一个重要度因子，来衡量像素点灰度值差值的计算参与度；然后以相邻像素点灰度值差值的个数评价图像是否清晰。然后采用自适应分阶段变步长搜索方式，完成显微镜图像焦点的自动定位。通过实验测试表明，本发明给出的聚焦评价算法具有计算复杂度低、单峰性好、时效性好的优点，能够实现快速、精准地显微镜自动聚焦。